Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии




Скачать 26,48 Kb.
НазваниеМолекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии
Дата03.02.2016
Размер26,48 Kb.
ТипДокументы
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИЕРСИНИЙ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ ЯКУТИИ.

Софронова О.Н.¹, Исаева М.П.², Богумильчик Е.А.3, Стенкова А.М.², Тищенко Н.М. ², Гузев К.В.², Романова И.А.¹, Ценева Г.Я. 3

¹ФБУЗ « Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)», г. Якутск; ²Тихоокеанский институт биоорганической химии имени Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук, г. Владивосток;

3ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург.

Резюме:

У 78 культур иерсиний, изолированных из органов млекопитающих, объектов окружающей среды и больных на территории Якутии, изучены биологическая и генотипическая характеристики. Определены наличие хромосомного гена термостабильного энтеротоксина ystB; установлено генетическое разнообразие, обусловленное, гетерогенностью генов gyrB и ompF и определен высокий уровень дивергенции у штаммов Yersinia kristensenii и Yersinia intermedia на основе gyrB-анализа. Показано, что в условиях вечной мерзлоты циркулируют различные виды Yersinia, при этом доминируют Yersinia enterocolitica 1A, обладающие патогенным потенциалом и формирующие собственную генетическую ветвь в пределах вида Yersinia enterocolitica. Показана принципиальная возможность применения многопраймерной ПЦР для детекции бактерий рода Yersinia с дифференциацией патогенных видов Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica.

Ключевые слова: Yersinia, Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, ПЦР, порин, энтеротоксин.

Введение.

Инфекции, вызываемые Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica, составляют значительную часть инфекционной патологии. Несмотря на достигнутые успехи в изучении многих аспектов проблемы иерсиниозов, актуальность этих инфекций сохраняется. Важной особенностью возбудителей указанных заболеваний является изменение их биологических свойств, а также пейзажа циркулирующих Yersinia, снижение доли ранее доминирующих серотипов и выявление новых серо-биотипов, ранее считавшихся непатогенными. Диагностика иерсиний трудна и не унифицирована, и это приводит к гиподиагностике кишечного иерсиниоза, заболевания которым нередко проходят под диагнозом «ОКИ неустановленной этиологии» (ОКИНЭ) [1]. Работ, посвященных изучению непатогенных, потенциально-патогенных или «редких» видов иерсиний, тем более возможности их участия в патогенезе человека и животных, крайне мало. В то же время, исследование непатогенных видов иерсиний открывает новые возможности для установления их этиологической роли и разработки более специфичных и чувствительных методов диагностики и профилактики инфекций, в том числе ОКИНЭ. Y. enterocolitica 1А долгое время рассматривали как авирулентный микроорганизм, не имеющий гено-фенотипических маркеров вирулентности (Bottone E.,1997). Однако последние исследования показали, что имеются патогенные и непатогенные варианты этой группы кишечных иерсиний [1].

Изучение фенотипических и молекулярно-генетических особенностей иерсиний также вносит существенный вклад в фундаментальные представления о циркуляции природных популяций микроорганизмов, их патогенном потенциале и структурной организации, обусловленной экологической средой обитания.

В настоящее время значительное место отведено методам генетического типирования иерсиний, интерес к которым в последние годы заметно возрастает. Эти методы используются для изучения генетического разнообразия иерсиний, сходства и различий популяций, циркулирующих в разных странах мира, в том числе в регионах России [1]. Молекулярно-генетические методы исследования широко применяются в практической медицине благодаря их высокой специфичности и чувствительности. Одним из перспективных методов идентификации бактерий является многопраймерная ПЦР, позволяющая выявлять несколько патогенов/мишеней при проведении всего одной реакции. Обнаружение генетического материала «непатогенных» видов иерсиний в биологическом материале человека может свидетельствовать о том, что клинические проявления инфекционного заболевания вызваны видом иерсиний, считавшимся ранее непатогенным [2].

На территории Якутии осуществляется постоянный мониторинг иерсиниозов. Выделение иерсиний из органов мелких млекопитающих, смывных вод овощей и поверхностей, почвы, воды открытых водоемов служит своеобразным индикатором, позволяющим судить о наличии благоприятных условий для циркуляции патогенных микробов. Важной эпидемиологической особенностью иерсиниозов на территории Якутии является периодическое выделение культур Yersinia kristensenii от больных ОКИ, ранее считавшихся непатогенными. В ходе микробиологического мониторинга территорий строительства нефтепровода, железной дороги, разработки алмазных месторождений, были изолированы бактерии рода Yersinia [10,11,12].

Цель: Целью исследования явилось изучение биологических и молекулярно-генетических особенностей бактерий рода Yersinia, циркулирующих на территории Якутии.

Материалы и методы:

Для изоляции культур бактерий рода Yersinia на территории Якутии из различных проб (органы мелких млекопитающих, членистоногие, вода открытых водоемов, почва, смывы овощей и смывы из объектов окружающей среды, биоматериал от людей) использовали традиционный бактериологический метод с «холодовым обогащением», последующим высевом материала на 3, 7, 10-15 сутки, дальнейшей биохимической идентификацией культуры до вида. В работе использованы, выделенные из объектов окружающей среды и от больного, 78 штаммов иерсиний, в том числе 6 – Y. pseudotuberculosis, 54 – Y. enterocolitica 1А, В; 18 – Y. kristensenii, Y. intermedia. Серотипирование проводили с использованием набора диагностических сывороток к Y. pseudotuberculosis серотипов О:1, О:3, к Y. enterocolitica серотипов О:3, О:4, О:4,32, О:4,33, О:5,27, О:6,31, О:7,8, О:9, О:13; О:13,7, также определяли вирулентность культур с сывороткой к вирулентным иерсиниям (СВИ) (производство НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) [5].

Для выявления специфических участков ДНК изолированных вирулентных штаммов Y. enterocolitica и штаммов Y. pseudotuberculosis использовали коммерческие тест-системы для проведения ПЦР «АмплиСенс® Yersinia enterocolitica-Eph» и «АмплиСенс® Yersinia pseudotuberculosis-Eph» (ГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва). Генотипирование штаммов по плазмидным и хромосомным факторам патогенности аil, pilP/Q, virF, yadA, ystА, ystB, fyuA, ypm a/c, рYV (yscQ,) осуществляли с использованием специфических праймеров [3,4,6], синтезированных в ЗАО «Синтол» (Москва).

Бактериальную ДНК выделяли из штаммов иерсиний стандартным методом фенол-хлороформной депротеинизации с протеиназой К и коммерческим набором Genomics DNA Purification Kit (MPI Fermentas, Литва). Идентификацию патогенных видов рода Yersina осуществляли методом многопраймерной ПЦР на основе выявления ompF гена [2]. Видовую идентификацию иерсиний проводили на основе секвенирования и анализа участка gyrB гена [13]. ПЦР-фрагменты очищали с помощью коммерческого набора DNA Extraction Kit (MPI Fermentas, Литва) и секвенировали на автоматическом ДНК анализаторе 3130хL (Applied Biosystems, США). Последовательности анализировали с использованием программы MEGA v.4 [14]. Синтез олигонуклеотидов был выполнен ЗАО « Евроген» (Москва). ПЦР проводили с использованием «горячего старта» в 25 мкл реакционной смеси с использованием HSТaq- полимеразы («Евроген», Россия). Реакционная смесь содержала 20-50 нг геномной ДНК с конечной концентрацией каждого праймера 0,3 мкМ и 0,2 мМ каждого дНТФ. Амплификацию осуществляли в термоциклере Gene Amp 2700 (Applied Biosystems, США) при следующих условиях: 1 цикл 950 С – 5 мин, 40 циклов: 940 С -20 с, 600 С – 20с, 720 С – 30с. Продукты ПЦР анализировали в 1,5% агарозном геле после окрашивания бромидом этидия.


Результаты и обсуждение.

Установлено, что изоляция иерсиний на территории Якутии носит циклический характер, при этом резервуарная роль, в основном, принадлежит мышевидным грызунам [8,9,18]. За период с 2008 по 2011 гг. проведено 16794 бактериологических исследований проб из объектов окружающей среды и биоматериала от людей. В результате выделены три культуры Y. pseudotuberculosis, 44 культуры Y. enterocolitica 1А, 1В, 57 культур Y. kristensenii, Y. intermedia. Y. frederiksenii (0,6 %). Также методом ПЦР исследовано 1669 проб из объектов окружающей среды, при этом ДНК Y. pseudotuberculosis выявлена в трех пробах, ДНК Y. enterocolitica - в 176 пробах, что составило 10,7 %. У изолированных штаммов Y. pseudotuberculosis серотипа О:1 [1], выделенных на территории Якутии, методом ПЦР с использованием специфических праймеров были выявлены хромосомный ген, кодирующий суперантиген (ypm А/С), а также ген, локализованный на плазмиде вирулентности иерсиний pYV 42-48 МДа (yscQ). Ранее молекулярными методами была доказана циркуляция штаммов Y. enterocolitica, содержащих гены плазмиды вирулентности pYV (yadA), хромосомные гены адгезии-инвазии аil и термостабильного энтеротоксина ystА [3,4,6]. В настоящих исследованиях обнаружено исключительное превалирование штаммов Y. enterocolitica биотипа 1А и единичные находки других биотипов (1В, 2, 4). К патогенным серотипам О:3 (биотип 4) и О:9 (биотип 2) было отнесено только два штамма Y. enterocolitica. В большинстве случаев штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А принадлежали к серотипам О:5,27; О:6,31; О:7,8, которые традиционно относили к непатогенным, однако, как показали наши исследования, они содержали патогенный фактор – ген, кодирующий термостабильный энтеротоксин YstB. Практически все штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А, изученные методом ПЦР, были ystB-положительными. Этот факт может свидетельствовать не только о патогенном потенциале Y. enterocolitica биотипа 1А, но также о возможной роли гена ystB в обеспечении высокого уровня адаптации микроорганизма к условиям внешней среды.

В современной систематике бактерий рода Yersinia отражены различные подходы - морфологический, биохимический, в меньшей степени, генетический, но практически не учитываются факторы, отражающие адаптационный характер в эволюции микроорганизмов при постепенном приспособлении к различным условиям существования в освоенной среде обитания [7]. Особый интерес в этом контексте представляют гены белков наружной мембраны (НМ), например, порины. Порины частично экспонированы на поверхности НМ и подвергаются разнообразным воздействиям окружающей среды. Наружные петли поринов взаимодействуют с антителами, фагами и колицинами. Например, OmpF порин E.coli является рецептором для фага К20 [14,15,16] и для колицинов А и N [17].

Нами ранее была разработана многопраймерная ПЦР для быстрой детекции бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y. pestis, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica [2]. В качестве ДНК-мишеней для создания праймеров в этой тест-системе были выбраны участки ompF гена, кодирующего неспецифический OmpF порин наружной мембраны иерсиний. Детекция и дифференциация осуществляется за счет наработки наборов ПЦР-фрагментов разной длины, специфичных для каждого вида иерсиний и обязательно включающих родоспецифический фрагмент. Нами использована многопраймерная ПЦР для быстрого разделения исследуемых штаммов на четыре группы: Y. spp. (один ПЦР-фрагмент длиной 450 нп), Y. pseudotuberculosis (два ПЦР-фрагмента - 426 и 756 нп), Y. enterocolitica (два ПЦР-фрагмента - 465 и 663 нп). и Y. enterocolitica subsp. palearctica (три ПЦР-фрагмента - 465, 663 и 270 нп). Распределение по группам было следующим: в группе Y. spp - 22 штамма, из них 17 были ранее определены как Y. enterocolitica 1A, два штамма - Y. kristensenii и три штамма - Y. spp. В группе Y. pseudotuberculosis – три штамма Y. pseudotuberculosis. В группе Y. enterocolitica - 12 штаммов Y. enterocolitica и в группе Y. enterocolitica subsp. palearctica - 17 штаммов Y. enterocolitica. Интересным было выявление дополнительной группы Y. enterocolitica, характеризующейся двумя ПЦР-фрагментами длиной 465 и 270 нп. Известно, что Y. enterocolitica является гетерогенным видом по биохимическим, серологическим и генетическим характеристикам, в соответствии с которыми выделены два подвида (Y. enterocolitica subsp. palearctica и Y. enterocolitica subsp. enterocolitica), шесть биотипов и более 50 серотипов. В связи с этим. был проведен углубленный анализ исследуемых штаммов Y. enterocolitica для точной видовой идентификации и молекулярно-генетической характеристики. Определение нуклеотидных последовательностей маркерных генов способствует проведению более глубокого эволюционного, таксономического и филогенетического анализа на основе построения детальных филогенетических деревьев и установления родственных связей между штаммами и популяциями. Нами определены нуклеотидные последовательности участка gyrB гена для 18 штаммов, представляющих все установленные группы. На общем филогенетическом дереве штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А группируются с типовыми штаммами биотипа 1А, формируя собственную ветвь в пределах вида Y. enterocolitica (рис. 1.). Кроме того, gyrB последовательности некоторых штаммов Y. kristensenii и Y. intermedia демонстрируют высокий показатель дивергенции, что может указывать на принадлежность к новым видам иерсиний, формирующихся под влиянием местных экологических условий. GyrB-генотипирование подтверждает гетерогенную структуру Y. enterocolitica биотипа 1А. Более глубокий анализ генетической структуры популяции Y. enterocolitica был выполнен в формате простой ПЦР, отдельно с каждой парой праймеров, направленных на наиболее вариабельные участки ompF гена Y. enterocolitica. Как видно из таблицы № 1, наибольшее число штаммов представлено Y11-подобным (Y. enterocolitica subsp. palearctica) вариантом порина. Вторую по численности группу составляли штаммы с IP2222-подобным вариантом порина, именно эти штаммы в многопраймерном ПЦР-анализе попадали в группу Y. spp. Полученные данные еще раз подтверждают сложную генетическую структуру популяции Y. enterocolitica, циркулирующей на территории Якутии.

Таким образом, установлена циркуляция различных видов Yersinia в условиях вечной мерзлоты. При этом возникает необходимость динамического изучения патогенного потенциала иерсиний, клоновой структуры популяций, генетики родства штаммов, изменчивости биологических свойств в экологии бактерий, определения некультивируемых форм иерсиний и новых видов в естественных экосистемах вечной мерзлоты. Определение ареала возбудителей иерсиниозов на Крайнем Севере России представляется чрезвычайно важным в плане установления возможной роли «непатогенных» иерсиний в качестве этиологических агентов.

Заключение.

1. Установлена циркуляция различных видов Yersinia в условиях вечной мерзлоты.

2. Подавляющее большинство иерсиний циркулирует среди мелких млекопитающих и в окружающей среде.

3. Циркулирующие в данном регионе штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А серотипов О:6,31; О:5,27; О:7,8, традиционно отнесенные к непатогенным, содержат хромосомный ген термостабильного энтеротоксина YstB. Следовательно, популяция Y. enterocolitica биотипа 1А обладает патогенным потенциалом.

4. Установлено генетическое разнообразие штаммов, обусловленное гетерогенностью gyrB и ompF генов. На основе gyrB-генотипирования установлено, что штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А на общем филогенетическом дереве иерсиний группируются с типовыми штаммами биотипа 1А, формируя собственную ветвь в пределах вида Y. enterocolitica.

5. На основе gyrB-анализа выявлены штаммы Y. kristensenii и Y. intermedia с высоким уровнем дивергенции, что может указывать на принадлежность их к новым видам иерсиний, формирующимся под влиянием местных экологических условий.

6. Показана принципиальная возможность использования многопраймерной ПЦР для детекции бактерий рода Yersinia с дифференциацией патогенных видов Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica. Система также идентифицирует некоторые штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А, которые обладают нехарактерными поринами, как штаммы Y.spp., что требует углубленного изучения Yersinia spp.


Литература:

  1. Иерсинии и иерсиниозы / Под ред. доктора мед. наук, профессора Г.Я. Ценевой - г. Санкт-Петербург.- 2006г.-С.-5, 6, 21,28.

  2. Стенкова А.М., Исаева М.П., Рассказов В.А..- Разработка многопраймерной ПЦР для идентификации бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y. enterocolitica // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.- 2008г.- №3. С.- 18-23.

  3. Богумильчик Е.А., Софронова О.Н. - Изучение инфицированности Yersinia enterocolitica мелких млекопитающих в Якутии // Материалы международной конференции Развитие научных исследований и надзор за инфекционными заболеваниями. – г. Санкт-Петербург.- 2010г. С.- 90-91.

  4. Софронова О.Н., Романова И.А., Никифоров О.И., и др.- К вопросу циркуляции Yersinia pseudotuberculosis среди мелких млекопитающих в Якутии // Журнал инфекционной патологии.- 2009 г. том 16, №3.-С.- 202

  5. Софронова О.Н., Богумильчик Е.А.- О циркуляции иерсиний на территории Якутии // Материалы научно-практической конференции Инфекции, обусловленные иерсиниями. г. Санкт-Петербург.- 2011г.- С.-98-99.

  6. Богумильчик Е.А., Софронова О.Н., Ценева Г.Я., Воскресенская Е.А.- Изучение инфицированности иерсиниями мелких млекопитающих, обитающих на территории Якутии // Материалы научно-практической конференции Инфекции, обусловленные иерсиниями.- г. Санкт-Петербург.- 2011г.- С.-30-31.

  7. Сунцов В.В., Сунцова Н.И.- Чума. Происхождение и эволюция эпизоотической системы (экологические, географические и социальные аспекты) // Москва: Изд-во КМК. 2006г. – С.-247.

  8. Герасимов К.А., Чернявский В.Ф., Никифоров О.И., Софронова О.Н.- Медицинское значение мелких млекопитающих Якутии // Сборник научно-практических трудов На рубеже веков.- г. Якутск.-2001г-С.- 71-73.

  9. Никифоров О.И., Чернявский В.Ф., Софронова О.Н. и др. - Пространственная эпизоотолого- эпидемиологическая характеристика природно-очаговых инфекций ( ПОИ в Южной Якутии // Вестник Российской Военно- медицинской Академии.- 2008г.- Приложение ( часть 2), № 2(22).-С.- 582-584.

  10. Чернявский В.Ф., Никифоров О.И., Софронова О.Н., и др.- Эпизоотолого-эпидемиологический потенциал природно-очаговых инфекций ( ПОИ) в зоне строительства меганефтепровода « Восточная Сибирь- Тихий Океан» в Южной Якутии // Вестник Российской Военно- медицинской Академии.- 2008г.- Приложение ( часть 2), № 2(22).- С. – 584.

  11. Кершенгольц Б.М., Чернявский В.Ф., Репин В.Е., и др.- Влияние глобальных климатических изменений на реализацию потенциала инфекционных заболеваний населения в Российской Арктике (на примере Якутии). Обзор // Экология человека.- 2009г.- №6.- С.34-39.

  12. Софронова О.Н., Богумильчик Е.А., Воскресенская Е.А., и др.– Микробиологический мониторинг иерсиниозов в Якутии // Якутский медицинский журнал.- 2012г.- №1 (37).- С. 69-72.

  13. Stenkova A.M., Isaeva M.P., Bystritskaya E.P., Rasskazov V.A., Rakin A.V. The molecular phylogeny of gyrB gene: a molecular marker for systemic of Yersinia // Adv. Exp. Med. Biol. – 2012.- V. 954. Р.- 198-201.

  14. Tamura K, Dudley J, Nei M & Kumar S (2007) MEGA4: Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) software version 4.0. Molecular Biology and Evolution 24:1596-1599.Tamura et al. - 2007.-Р.- 1596 – 1599.

  15. Silverman J.A., Benson S.A. Bacteriophage K20 requires both the OmpF porin and lipopolysaccharide for receptor function // J. Bacteriol.- 1987. V. 169.- P. 4830-4833.

  16. Traurig M., Misra R. Identification of bacteriophage K20 binding regions of OmpF and lipopolysaccharide in Escherichia coli K-12 // FEMS Microbiol. Lett. - 1999. V. 181. - P. 101-108.

  17. Fourel D., Mizushima S., Bernadac A., Pages J.-M. Specific regions of Escherichia coli OmpF protein involved in antigenic and colicin receptor sites and in stable trimerization // J. Bacteriol. - 1993. V. 175.- P. 2754-2757.

  18. Sofronova O.N., Tseneva G.Ya. Circulation of Yersinia in the far North of Russia in conditions of permafrost // Yersinia 2010. 10 th International Symposium.- 2010.- Р- 104.



Таблица 1. Сравнительная характеристика штаммов Y. enterocolitica биотипа 1А.

Группы, штаммы*

Количество

Серотип

Источник

ystB

(N/n)**

ompF

669R

Ye-R

614R

Ye-2R

Y11-подобные, 1501, 1502, 1531, 1462

20

О:6,31, О:5,27, О:7,8

Мелкие млекопитающие (4),

Внешняя среда (11)

4/4

+

+

+

+

8081 подобные, 1464, 1450

9

О:6,31

Мелкие млекопитающие (2),

Внешняя среда (7)

4/4

+

-

-

+

IP2222-подобные, 1533

16

О:6,31

Мелкие млекопитающие (2),

Внешняя среда (7)

5/5

+

-

-

-

1328


7

О:5,27, О:6,31

Мелкие млекопитающие (2),

Внешняя среда (6)

5/5

+

+

+

-

1468

2




Мелкие млекопитающие (1),

Внешняя среда (3)

Н.и.

+

+

-

-

1523

2




Мелкие млекопитающие (1),

Внешняя среда (2)

Н.и.

+

-

+

+

Примечание: *Представлены штаммы, для которых выполнено секвенирование gyrB гена.

** N – количество исследованных штаммов, n – количество ystB-положительных штаммов.


Рисунок 1. Филогенетическое дерево иерсиний, построенное методом ближайших соседей на основе gyrB гена. Символом ● показаны штаммы исследуемых иерсиний, последовательности остальных штаммов иерсиний представлены в базе данных GeneBank,

Похожие:

Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconМорфологические и молекулярно-биологические факторы прогноза рака мочевого пузыря
Работа выполнена на базе Московского научно-исследовательского онкологического института им. П. А. Герцена Росмедтехнологий
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconТема «основное уравнение молекулярно-кинетической теории газов» 10 класс
Обучающие: познакомить с понятием идеального газа, вывести основное уравнение молекулярно-кинетической теории газов
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconИсследование истории казачества на территории Казахстана и обобщение имеющихся данных о современном положении казаков
Проблема: Конец советских реалий, от идеологии до социальной политики и механизмов идентификации, не принес на казахстанские просторы...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconУчебно-методический комплекс по междисциплинарному курсу
Основные понятия и термины по теме: методы производственного обучения, словесные методы, наглядно-демонстрационные методы, практические...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconОценка экологического состояния атмосферного воздуха территории моу глуховская сош
Для успешного выполнения работы мы изучили методы диагностики и определили степень загрязненности воздуха на территории школы. Школа...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconПредмет аналитической химии, ее структура. Методологические аспекты аналитической химии; ее место в системе наук, связь с практикой. Значение аналитической
Виды анализа: изотопный, элементный, структурно-групповой (функциональный), молекулярный, вещественный, фазовый. Химические, физические...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconМетодические рекомендации по организации самостоятельного изучения курса «Общая вирусология» Для специальности 020201. 65 Биология
Методы культивирования, индикации и идентификации вирусов: Методические рекомендации по организации самостоятельного изучения курса...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconЭпидемиология и молекулярно-генетические основы наследственных заболеваний нервной системы в республике башкортостан
Эпидемиология и молекулярно-генетические основы наследственных заболеваний нервной системы
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconОбщество с ограниченной ответственностью
Документация по планировке территории в составе: проект планировки территории и проект межевания территории, в отношении земельных...
Молекулярно-биологические методы идентификации иерсиний, циркулирующих на территории якутии iconМолекулярно-генетическое исследование гена лейцинбогатой киназы 2 ( lrrk 2 ) у лиц с болезнью паркинсона
Молекулярно-генетическое исследование гена лейцинбогатой киназы 2 (lrrk2) у лиц с болезнью паркинсона
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©lib2.znate.ru 2012
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница